由于進(jìn)行了多次、大量的檢測(cè),PCR實(shí)驗(yàn)室存在污染的可能,這不僅會(huì)影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量和結(jié)果,還對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員的身體健康有損害,特別是對(duì)于一些傳染性疾病的檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)存的不足有哪些?
一、PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中易發(fā)生污染
產(chǎn)生污染主要有以下4個(gè)原因:
1.試劑的污染。在試劑的配制過(guò)程中,接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導(dǎo)致試劑被污染。
2.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。這也是最常見(jiàn)的污染原因。PCR產(chǎn)物經(jīng)反復(fù)多次的擴(kuò)增,其復(fù)制量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)PCR的檢測(cè)極限,所以即使是極微量的污染也足以造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽(yáng)性。
3.氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴(kuò)散至空氣中極有可能造成PCR產(chǎn)物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產(chǎn)生的,開(kāi)蓋、晃動(dòng)反應(yīng)管及污染加樣器的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠從而導(dǎo)致交叉污染。PCR實(shí)驗(yàn)室只要出現(xiàn)了污染,之前
結(jié)果報(bào)告都會(huì)變?yōu)闊o(wú)效而且也無(wú)法進(jìn)行其他的實(shí)驗(yàn)操作。必須找出并徹底清除污染源,才能得到準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4.待測(cè)樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴(yán)導(dǎo)致樣品與外界接觸被污染,其次在核酸提取過(guò)程中使用了被污染的移液器或槍頭導(dǎo)致樣品被污染;另外,某些樣品中含有病毒,若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。
二、規(guī)范管理不到位
為了提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量,避免實(shí)驗(yàn)室污染以及確保實(shí)驗(yàn)室的生物安全,規(guī)范有效的管理是實(shí)現(xiàn)這一切的根本措施。但有時(shí)會(huì)出現(xiàn)管理不到位甚至是疏忽的地方,比如隨意出入實(shí)驗(yàn)室,沒(méi)有按照規(guī)范穿戴口罩、鞋套,試驗(yàn)期間緩沖間兩側(cè)門(mén)同時(shí)打開(kāi),實(shí)驗(yàn)完畢后忘記開(kāi)紫外燈消毒等。
這些不規(guī)范的行為為實(shí)驗(yàn)室的安全和污染埋下了隱患,從而影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,有效的管理和實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程的規(guī)范執(zhí)行尤為重要。
三、實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制存在缺陷
實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制分為:室間質(zhì)量控制和室內(nèi)質(zhì)量控制。
室間質(zhì)量控制是指客觀(guān)比較實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異,由外部機(jī)構(gòu)采取一定的方法,連續(xù)、客觀(guān)地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果,使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。
室內(nèi)質(zhì)量控制是指實(shí)驗(yàn)室人員通過(guò)一定的方法和步驟,連續(xù)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作的可靠程度,旨在監(jiān)測(cè)和控制實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度,提高實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性,以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠及可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。
疫情發(fā)生以來(lái),PCR實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行核酸檢測(cè)中的重要性不言而喻,特別是對(duì)于進(jìn)行檢測(cè)的患者來(lái)說(shuō),了解PCR實(shí)驗(yàn)室可能造成污染的原因,能夠有效的幫助我們減少污染的可能進(jìn)而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。